Descrizione
Taq DNA polimerasi è una DNA polimerasi ricombinante termostabile derivata dal batterio termofilico Thermus aquaticus . Il suo peso molecolare è di 94 kDa. Taq DNA polimerasi può amplificare il DNA bersaglio fino a 5 kb (modello semplice). La velocità di allungamento è di 0.9~1,2 kb/min (70~75°C). Essa ha un'attività di polimerasi da 5' a 3' ma manca di un'attività di esonucleasi da 3' a 5' che dà come risultato un prodotto di PCR sovrastante 3'-da.
Definizione unità
Una unità è definita come la quantità dell'enzima necessaria per catalizzare l'incorporazione di 10 nmoli di dNTP in una forma insolubile in acido in 30 minuti a 70°C usando DNA di sperma di ering come substrato.
Buffer di archiviazione
20mMTrisCl ( pH8,0), 100mm KCl, 3,2mm MgCl2 1mm DTT , 0.1% Triton X-100, 0.1% Tween 20, 0,2mg/ml BSA, 50% (v/v) glicerolo
Tampone PCR 10X con Mg2 +
100 mMTris -HCl (PH 8.8), 500 mMKCl, 1% Triton-X-100, 16 mm MgCl2
Applicazioni
• amplificazione PCR di frammenti di DNA fino a 5 kb
• marcatura del DNA.
Sequenziamento del DNA •.
• PCR per clonazione.
Controllo qualità
L'assenza di endodesossiribonucleasi, esodesossiribonucleasi e ribonucleasi è confermata da adeguate prove di qualità. Funzionalmente testato nell'amplificazione di un gene a copia singola da DNA genomico umano.
Alimentazione
Pacchetto piccolo o ordine in blocco
Conservare tutti i componenti a -20°C.