BST DNA polimerasi , esonucleasi Minus 8, 000 U/ml

BST  DNA polimerasi, esonucleasi   Minus
8,000 U/ml

Cat.  N. P1111  200 unità di misura di prova (1 x 25 µL)
Cat.  N. P1112  2,000 unità (1 x 250 µL)
Cat.  N. P1113  10,000 unità (5 x 250 µL )
Include tampone DNA polimerasi B 10X (1.2 ml per 2,000 unità)
Conservare a -20 ºC.
Solo per uso di Ricerca.   Non utilizzare nelle procedure diagnostiche.

Specifiche tecniche
  Descrizione del prodotto
BST  DNA polimerasi, esonucleasi Minus, 8,000 unità/ml.
Buffer di archiviazione
10 mm Tris-HCl, pH 7.5, 50 mm KCl, 1 mm DTT, 0.1 mm EDTA, 0.1% Triton X-100 e 50% glicerolo.
Stabilità
BST  DNA polimerasi, esonucleasi Minus è stabile per un anno dalla data ricevuta se conservata a -20 ºC.
Condizioni di reazione consigliate
8 U BST  DNA polimerasi, esonucleasi Minus; 1X DNA polimerasi tampone B contenente Tris-HCl 20 mm pH 8.8, 10 mm (NH4) ^2S04 , KCl 10 mm, MgS04 2 mm e Triton X-100 0.1 %.
Determinazione dell'attività
Una unità catalizza l'incorporazione di 10 nmol di dNTP in materiale insolubile in acido in 30 minuti a 65°C in 20 mm Tris-HCl pH 8.8, 10 mm (NH4) _2SO4,10 mm KCl, 2 mm MgS04 , 0.1% Triton X-100, 30 Nm M13mp18 sDNA, 47 Nm innesco sequenziatore M13(-24) 70 mer, 200 µM di dGTP, dATP, dTTP, dCTP (una miscela di non marcato e [ ^33P ]dCTP) e 0.1 mg/ml di BSA.
Assenza di endonucleasi o attività di nicking
L'incubazione di 8 U di BST  DNA polimerasi, esonucleasi Minus con 1 µg di pUC19 DNA per 16-18 ore a 37 ºC non ha prodotto striscio di bande come rilevato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
Assenza di attività di esonucleasi
L'incubazione di 8 U di BST  DNA polimerasi, esonucleasi Minus con 1 µg di DNA lambda tagliato da HindIII per 16 ore a 37 ºC e 65 ºC non ha prodotto striscio di bande su gel di agarosio. Le attività di esonucleasi a filamento singolo e a doppio filamento sono state testate incubando 10 µL di enzima a 8 U/ µLwith di substrato di DNA radiomarcato per un'ora a 37 ºC e 65 ºC, con conseguente rilascio inferiore al 0.1% di conteggi solubili in TCA.
Purezza
>90% puro dalla PAGINA SDS. Nessuna contaminazione del DNA rilevabile. 10 µL di enzima a 8 U/ µL del campione sono stati testati per  la contaminazione di DNA genomico di E. coli mediante PCR amplificante con  i primer ribosomali di E. coli 16S.